pYLCRISPR/Cas9多靶点载体介绍
张~科院 2019-03-28 11:54:22 CRISPR/Cas9是新近发展的基因组编辑技术。CRISPR/Cas9切割靶序列仅需要single-guide RNA (sgRNA)以及由sgRNA引导的Cas9蛋白,比锌指核酸酶(ZFNs),TALENs更加简便,高效,因而成为基因组编辑工具的首选。
我们利用CRISPR/Cas9技术可方便地进行多重靶向的特征,构建了一套用于单子叶和双子叶植物的多靶点CRISPR/Cas9基因打靶载体系统。
本套载体将Cas9蛋白表达盒整合到双元载体上,用于装载多个sgRNA表达盒的多克隆位点Bsa I位于靠近双元载体RB位置。sgRNA表达盒元件设在中间质粒载体上,利用酶切连接和PCR方法拼装好,再利用Golden Gate或Gibson Assembly克隆方法组装到双元载体上。本载体系统已经发表(Ma et al., 2015, Molecular Plant, DOI:10.1016/j.molp.2015.04.007)。